小動物活體成像技術(shù)為生命科學(xué)研究提供了無創(chuàng)、動態(tài)觀察生物過程的強大工具。然而，要獲得科學(xué)、可靠且具有統(tǒng)計學(xué)意義的結(jié)果，嚴謹?shù)膶嶒炘O(shè)計至關(guān)重要。其中，對照設(shè)置、時間點選擇和樣本量規(guī)劃是確保實驗成功與結(jié)論可信的三大基石。
一、對照設(shè)置：
對照組是實驗設(shè)計的“標尺”，用于排除非特異性信號和系統(tǒng)誤差。
陰性對照：這是較核心的對照。例如，在研究腫瘤生長時，應(yīng)設(shè)置未接種腫瘤細胞的健康動物作為陰性對照，以確認背景信號(如自發(fā)熒光)水平。在基因治療研究中，注射空載體或無關(guān)序列的動物可排除載體本身的影響。
陽性對照：用于驗證成像系統(tǒng)和模型的有效性。例如，在測試一種新的抗腫瘤藥物時，可設(shè)置一個已知有效的陽性藥物組，確保實驗系統(tǒng)能檢測到預(yù)期的治療效果。
空白對照(僅適用于熒光成像)：對于使用外源性熒光探針的實驗，需設(shè)置未注射探針但其他處理相同的動物，以評估組織自發(fā)熒光的干擾。
假手術(shù)/處理對照：當實驗涉及手術(shù)或特殊處理時，需設(shè)置僅進行相同操作但不實施關(guān)鍵步驟(如不注射細胞、不結(jié)扎血管)的對照組，以排除操作本身造成的應(yīng)激反應(yīng)。
二、時間點選擇：
活體成像的優(yōu)勢在于其動態(tài)性，合理選擇時間點能完整描繪生物過程的演變。
基線掃描：在干預(yù)(如給藥、接種)前進行初次掃描，獲取每個動物的本底信號，用于后續(xù)的自身對照和數(shù)據(jù)歸一化。
動態(tài)監(jiān)測：根據(jù)研究目標的生物學(xué)過程速度來設(shè)定。急性過程(如炎癥、藥物分布)可能需要分鐘或小時級別的密集掃描；慢性過程(如腫瘤生長、神經(jīng)退行)則需數(shù)天、數(shù)周甚至數(shù)月的定期監(jiān)測。關(guān)鍵是要覆蓋過程的起始、高峰和消退(或穩(wěn)定)階段。
終點驗證：實驗結(jié)束時，通常需要進行組織學(xué)、分子生物學(xué)等離體分析，將活體成像結(jié)果與“金標準”進行關(guān)聯(lián)驗證。
三、樣本量規(guī)劃：
樣本量過小，統(tǒng)計效力不足，可能無法檢測到真實差異(假陰性)；樣本量過大，則違背3R原則(減少、優(yōu)化、替代)。應(yīng)基于預(yù)實驗數(shù)據(jù)，使用統(tǒng)計學(xué)方法(如功效分析)計算所需樣本量。需考慮預(yù)期效應(yīng)大小、數(shù)據(jù)變異性(標準差)和可接受的顯著性水平(α)與統(tǒng)計功效(1-β)。通常，每組5-10只動物是常見范圍，但具體需根據(jù)實驗設(shè)計嚴謹計算。
精心設(shè)計的對照、科學(xué)規(guī)劃的時間點和合理計算的樣本量，是小動物活體成像研究從“好看圖片”走向“可靠科學(xué)發(fā)現(xiàn)”的必經(jīng)之路。忽視這些原則，再先進的儀器也難以產(chǎn)出高質(zhì)量的科研成果。
關(guān)注公眾號