細胞增殖檢測是通過定量分析細胞在特定條件下的數(shù)量變化、代謝活性或DNA合成等指標,評估細胞生長、分裂及增殖能力的關(guān)鍵技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、藥物篩選及臨床診斷。
細胞增殖檢測的核心檢測方法:
直接計數(shù)法
原理:通過血細胞計數(shù)板或自動細胞計數(shù)儀直接統(tǒng)計細胞數(shù)量,繪制生長曲線評估增殖速率。
特點:操作簡單、成本低,但無法區(qū)分增殖與非增殖細胞,適合初步篩查。
應(yīng)用:基礎(chǔ)研究中的細胞生長曲線繪制、藥物處理后的細胞數(shù)量變化監(jiān)測。
代謝活性檢測法
原理:利用活細胞代謝能力還原底物(如MTT、CCK-8),通過檢測吸光度或熒光強度間接反映細胞數(shù)量。
特點:操作簡便、適合高通量篩選,但受細胞代謝狀態(tài)影響(如靜止期細胞可能呈假陰性)。
應(yīng)用:藥物毒性篩選、細胞活力評估。
DNA合成檢測法
原理:標記DNA合成原料(如BrdU、EdU),通過抗體或化學(xué)發(fā)光檢測增殖細胞。
特點:特異性高、能準確反映DNA合成活性,但需固定細胞(無法進行后續(xù)活細胞實驗)。
應(yīng)用:細胞周期分析、藥物對DNA合成的影響研究。
細胞周期分析法
原理:結(jié)合PI染色與流式細胞術(shù),檢測DNA含量分布,分析各周期(G0/G1、S、G2/M)細胞比例。
特點:可精確評估增殖指數(shù),但需優(yōu)化細胞固定和染色條件。
應(yīng)用:腫瘤細胞增殖動力學(xué)研究、藥物對細胞周期的影響分析。
蛋白質(zhì)標記法
原理:檢測增殖相關(guān)蛋白(如Ki-67、PCNA)的表達水平,通過免疫組化或流式細胞術(shù)定量分析。
特點:適用于組織切片分析,但需優(yōu)化抗體選擇和實驗條件以避免非特異染色。
應(yīng)用:臨床樣本中腫瘤細胞增殖活性評估。
ATP含量檢測法
原理:基于ATP與活細胞數(shù)目的線性關(guān)系,通過化學(xué)發(fā)光法檢測ATP含量反映細胞活力。
特點:靈敏度高、操作快速,但需排除死細胞干擾。
應(yīng)用:細胞活力檢測、藥物毒性評估。